抑癌基因PTEN在大肠癌中的表达及临床意义

　　大肠癌是临床较常见的消化道恶性肿瘤，其发生和发展过程是一个涉及多基因参与复杂病理过程，其中癌基因激活和抑癌基因失活引起的细胞增殖异常是其中重要分子机制之一[1]。第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因（phosphataseandtensionhomlogydeletedonchromosome10，PTEN）是目前发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，在恶性肿瘤细胞的增殖、分化、浸润和凋亡中起抑制作用[2，3]。近年来研究发现在许多恶性肿瘤中表达减少或缺失，并引起肿瘤细胞无限制生长，但有关PTEN基因在大肠癌组织中的表达及临床意义国内外研究不多[4，5]。本研究观察了抑癌基因PTEN在大肠癌组织中的表达及临床意义，报道如下。
　　1资料与方法
　　1.1一般资料
　　选择2008年1月～2013年4月两院普外科收治的大肠癌患者70例。纳入患者均具有完整临床资料且经病理学检查证实，且所有患者术前均未进行任何形式的化疗、放疗或免疫治疗。其中男38例，女32例；年龄36～89岁，平均（64.7±7.2）岁。另选择同期30例癌旁正常大肠组织（距肿瘤边缘>5cm）作对照组，其中男17例，女13例；年龄38～87岁，平均（65.0±7.1）岁。两组患者在性别、年龄方面比较无明显统计学差异（P>0.05），具有可比性。
　　1.2免疫组化染色
　　采用免疫组化S-P法检测PTEN的表达。组织经10%福尔马林固定，石蜡常规包埋4μm连续切片，进行HE染色和免疫组化S-P法染色。4μm石蜡切片常规逐级脱蜡至水，3%H2O2室温孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶的活性，用微波抗原进行修复，滴加正常的羊血清封闭15min，倾去血清滴加PTEN一抗工作液4℃过夜，后滴加生物素标记二抗工作液室温孵育15min，再滴加辣根酶标记链霉卵白素室温孵育15min。各步骤间PBS冲洗5min×3次。常规DAB显色、复染、脱水、透明、封片和镜检。用已知阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。鼠抗人PTEN单克隆抗体为SantaCruz公司产品，免疫组化S-P试剂盒购自福州迈新公司，严格按照试剂盒说明书进行实验操作。
　　1.3结果判定
　　免疫组化结果判断标准是以细胞浆见棕褐色颗粒者为阳性细胞。按照染色的有无及强度进行记分，其中0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色；按照阳性染色细胞百分率记分，其中1分为11%～50%，2分为51%～75%，3分为>75%，两项记分得分相乘结果>3为（+），否则为（-）。
　　1.4统计学处理
　　采用SPSS17.0forwindows统计学分析软件。计数资料结果以率[n（%）]表示，比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。本文相关性检验资料属于等级资料，采用非参数检验的Spearman相关系数。
　　2结果
　　2.1PTEN在大肠癌组织和癌旁组织中的表达的差异
　　70例大肠癌标本中PTEN的阳性表达为32例。30例癌旁正常组织中PTEN表达均为阳性。大肠癌组织中PTEN的阳性率明显低于癌旁正常组织，比较有明显统计学差异（χ2=26.27，P<0.01）。见表1。
　　2.2大肠癌组织中PTEN的表达与生物学行为的关系
　　大肠癌组织中PTEN表达与生物学行为的关系较密切，与组织分化程度呈正相关（r=0.30，P<0.05），与淋巴结转移和Dukes分期呈负相关（r=-0.27，P<0.05；r=-0.26，P<0.05）。见表1。
　　3讨论
　　大肠癌是消化道的高发恶性肿瘤，其发病率仅次于胃癌及食管癌。近年来由于饮食结构的改变，大肠癌发病率及死亡率呈逐渐上升趋势，尤其是大肠癌的中远期进展、远处转移和复发较快，生存率仍偏低。因此明确大肠癌的发生发展及侵袭转移机制是提高大肠癌患生存率和降低死亡率的关键[1]。大肠癌的发生是遗传和环境因素等多种因素共同作用的结果，抑癌基因的失活可促进细胞的增殖，抑制凋亡和促进肿瘤的发生在其中起重要作用。PTEN是近10年来新发现的一个抑癌基因，位于人染色体10q23.3位点，全长约218kb，有9个外显子，其编码由403个氨基酸残基组成的蛋白质[6-8]。PTEN编码的蛋白具有酪氨酸磷酸激酶活性，可抑制酪氨酸的磷酸化，对细胞增生、增殖、凋亡、粘附和迁移和细胞周期起调控作用，PTEN失活则促进肿瘤进行性生长和肿瘤细胞增殖活性增加，PTEN因其独特的作用途径和在多种人类肿瘤的发病中的重要性而备受重视[9-11]。
　　近年来研究发现PTEN基因的突变或表达缺失与大肠癌的发生、发展和预后的关系密切。马颖等[12]研究发现PTEN在正常大肠组织、大肠腺瘤、大肠癌组织中的表达率分别为100%、70%和51.61%，呈逐级下降的趋势，统计学分析大肠癌中PTEN的表达率明显低于非癌组。推测PTEN蛋白的丢失大肠癌发生、发展过程中可能起重要作用。谷化平等[13]研究发现大肠癌组织中PTEN蛋白表达率明显低于大肠腺瘤和正常大肠黏膜组织，提示PTEN基因缺失或突变与大肠癌的发生和发展关系密切。本研究结果发现大肠癌组织中PTEN的表达率明显低于癌旁正常组织，与上述的研究报道相符，提示PTEN基因异常改变参与大肠癌的发生与发展过程，可成为大肠癌基因诊断的新靶点。近年来国内外的研究发现大肠癌组织中PTEN的表达与其生物学行为的关系较密切。张敬伟[14]研究发现大肠癌组织中PTEN蛋白的表达与其分化程度呈正相关，即癌组织的分化程度愈差，其表达水平愈弱；PTEN蛋白表达还与淋巴结转移、Dukes分期呈负相关。曲洪滨等[15]研究发现大肠癌组织中PTEN蛋白的表达与癌细胞的分化、临床分期及淋巴结转移等生物学行为密切相关。本研究结果发现大肠癌组织中PTEN表达与组织分化程度呈正相关，与淋巴结转移和Dukes分期呈负相关。提示PTEN基因不仅与大肠癌的发生发展关系密切，而且其表达水平与大肠癌的生物学行为具有明显相关性，参与大肠癌恶化演变、浸润和转移过程。

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