精子形态分析标准化研究进展(2)

　　1.4.1人工计数分析目前，精子形态分析的主要方法是传统的光学显微镜下人工计数分析，在一定程度上依赖检测人员的水平，因此结果受主观因素影响较大。主要由于在显微镜下人的肉眼很难准确区别与精子形态相关的参数尺寸，检测人员的长时间用眼疲劳、检验技术水平及经验参差不齐等都会造成结果的误差[19]。

　　1.4.2计算机辅助分析计算机辅助分析（computer-aidedsemenanalyzers，CASA）对捕捉到的精子图像进行多种参数的测量与计算，根据内置标准得出客观判断。CASA系统可把精子头部和中段分类为正常或不正常，还可给出头部和中段尺度、头部椭圆率和匀称性的均数、标准差和中位数，以及对精子顶体区进行测量，可检测出肉眼无法发现的非正常形态精子。因此，CASA分析借助计算机将精子形态量化，是精子形态检测标准化发展方向之一。

　　CASA分析也存在诸多问题尚待解决，由于精子染色过深或过浅均可导致计算机系统不能精确地识别，造成形态参数测量与计算错误；标本涂片的处理、精子密度、分布不均一性等都会影响计算机分析精子形态参数的能力；计算机也有可能将与精子头大小相似的细胞碎片、染料颗粒或其他细胞误判为精子；另外，不同的染色方法也可能会使精子头部形态参数计算错误[20]。在计算机图像分析的同时进行人工修正，可提高CASA分析的检测质量[19]。

　　2精子形态分析的质量控制

　　2.1内部质量控制的措施

　　实验室应该执行有效的室内质控和质量保证计划，以保证报告结果的准确性和可重复性，并及时分析误差来源。一方面，根据WHO手册的标准建立实验室精子形态分析的操作手册，并严格遵照其执行。即每一标本制作2张以上涂片检测，结果在检测差异属于误差允许范围内才可接受；检测每张涂片计数精子数要求至少200条，以减少结果的随机误差。另一方面定期评价技术人员检测水平。精子形态学的质量控制可用照片、录像带或已固定染色或未染色的玻片，也可从日常检测中选择已经评估过的一些形态涂片永久保存。Cooper等[21]提出，选择有正常和异常精子形态学百分率的标本，制备大量的精子涂片，将它们于4℃下贮存，然后定期染色和分析。每一标本正常形态的靶值可通过20张涂片的平均百分率确定，技术人员的检测水平可通过绘制Levey-Jennings质控图来监测。

　　徐威香等[6]对制备精子形态分析室内质控品进行了尝试，将检测后剩余精液中的精子经过回收和加工，制备成精子质控品，经室内质控观察，其形态完好，色彩清晰，稳定性至少达7个月。

　　2.2外部质量控制的措施

　　目前，国内外均未能开展精子形态分析的大规模、多中心的室间质控。由于男科实验室检测缺乏标准化，使不同实验室的分析结果难以比较，可能导致患者在不同的实验室其诊断结果不同。Keel等[17]研究发现，在比较实验室间精子形态学结果时存在显著的差异性，在参加实验室间CV变化为15%～93%。进行外部质量控制可行的方案是，首先对所有检测人员统一检测方法与分类标准，可通过集中培训的方式。检测方法与分类标准统一后，中心实验室发放质控标本对各实验室检测人员进行连续监控。外部质控关键在于培训及质控标本的选取，要保证标本具有典型性及一致性。

　　3展望

　　由于精子形态人工计数分析主观性较强，因此，依靠计算机辅助分析将精子形态量化，可能是其标准化的发展方向的最终选择。精子形态分析中技术要求高、操作难以标准化，因此必须进行质量控制以发现并纠正系统误差和随机误差，以保证分析结果的参考价值。研究证实，提供完全的理论背景及反复的实践训练，结合内部质控和外部质量控制措施，对提高实验室人员的技能高度有效[22]。但是目前这类训练太少，且对于何种方法最有效尚未达成共识[23]。

　　精子形态分析必须建立完善的检测技术体系和相应的质量控制体系，以保证为患者和医生提供准确、可重复和有临床意义的分析结果。应采用公认的WHO操作标准将精子形态分析操作和报告结果标准化，规范内部质量控制措施，并从操作手册建立、仪器定期校准、人员培训等方面合理地实施质量控制。同时，鼓励实验室通过参加外在质量评估项目，以逐步提高检测结果的一致性和可信性。

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