高脂血症(hyperlipaemia,HLP)是老年人的常见病,会导致冠心病、动脉硬化、脑血管等疾病。近年来随着人们饮食中脂肪摄入的增多与运动量的减少,HLP的发病率在不断升高[1-3]。目前用于治疗高脂血症的西药因其起效快且疗效肯定而受到青睐,但是西药都有不同程度的毒副作用,而中药在治疗高脂血症,防止心脑血管疾病发生等方面有着独特的优势[4-6]。蓝参降脂方由沙棘、绞股蓝、决明子等药食同源药材组方而成,临床用于治疗HLP效果显著。目前该方剂已作为基本方应用于降脂类新药蓝参降脂片的研制与开发。本实验利用实验性HLP小鼠模型,研究蓝参降脂方对高脂模型小鼠血脂及肝脏指数的影响,为蓝参降脂方进一步的研制与开发提供科学依据。
1材料与方法
1.1药物与试剂
蓝参降脂方(LS)提取物:由广西中医药大学制药厂提供,为乙醇提取物,每克相当于生药量4.2g。实验时称一定量药膏加蒸馏水研磨配制成实验所需剂量。非诺贝特胶囊为法国利博福尼制药公司产品,批号17944;胆固醇为成都市科龙化工试剂厂生化试剂,批号20111104;去氧胆酸钠为美国AMRESCO公司产品,北京索来宝分装,批号20100416;丙硫氧嘧啶片为南华精华制药股份有限公司产品,批号110802;吐温-80℃(化学醇)为国药集团化学试剂有限公司产品,批号F20100302;猪油为自制;总胆固醇(TC)试剂盒:长春汇力生物技术有限公司产品,批号2012027;三酰甘油(TG)试剂盒:长春汇力生物技术有限公司产品,批号2012027;高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒:长春汇力生物技术有限公司产品,批号2012049;低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)试剂盒:长春汇力生物技术有限公司产品,批号2012070。
1.2仪器
紫外可见分光光度计(UV-2550):日本岛津公司;高速微量离心机(LG16-W):北京医用离心机;电热恒温水溶锅(LSY):北京市医疗设备厂;电子天平(JA5003N):上海精密科学仪器有限公司;微量移液器:上海求精生化试剂仪器有限公司。
1.3动物
昆明种小鼠,体重18~22g,雌雄各半,清洁级,由广西医科大学实验动物中心提供,合格证号SCXK(桂)2012-0010。
1.4方法
1.4.1脂肪乳剂的配制取1g丙硫氧嘧啶于乳钵中研细备用。取20g猪油于40℃水浴加热融化,置乳钵中,加入胆固醇10g、丙硫氧嘧啶1g,充分搅拌,溶解。再徐徐加入10%去氧胆酸钠水溶液20ml,并不断搅拌,然后加入5ml吐温-80℃,研磨乳化均匀,最后加蒸馏水至100ml。装入密闭容器中,冷藏,使用时先于37℃水浴融化[7-11]。
1.4.2动物分组及实验方法取健康昆明种小鼠50只[体质量(20±2)g],雌雄兼用,按体质量随机分为5组,依次为正常组、高脂模型组、阳性药非诺贝特组(40mg/kg)、LS高剂量组(20g/kg)、LS低剂量组(10g/kg),每组10只。除空白对照组外,其他组小鼠连续灌服脂肪乳剂(0.2ml/10g),7d后,每天下午4:00,阳性对照组给予非诺贝特(40mg/kg),LS组给予相应的药量,空白组和高脂模型组给予等体积的生理盐水,给药剂量均为0.2ml/10g;每天上午9:00,除空白组外,其他组小鼠继续灌服脂肪乳剂(0.2ml/10g)。连续给药14d。于末次给药后禁食12h,不禁水,摘眼球取血后于3500r/min离心15min,分离血清,按照试剂盒说明测定分离血清TC、TG、LDL-C、HDL-C。小鼠取血后,颈椎脱臼处死并分离肝脏,经生理盐水洗去污血后用滤纸吸干,称量肝脏质量。按公式①、②分别计算动脉粥样硬化指数(AI)[12]与肝脏指数。
①AI=(TC-HDL-C)/(HDL-C)
②肝脏指数/%=(肝脏质量/体质量)×100
1.5统计方法
实验所得数据采用PEMS3.1统计软件进行分析,数据以x±s表示,各用药组与正常对照组或模型组之间比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
①高脂模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C、AI显著高于正常对照组(P<0.01或P<0.05),HDL-C显著降低(P<0.01),表明高脂血症小鼠模型诱导成功。②蓝参降脂方高、低剂量组与高脂模型组比较,均能显著降低小鼠血清TC、TG、LDL-C、AI(P<0.01或P<0.05),提高HDL-C(P<0.05),揭示蓝参降脂方能降低血清血脂水平,预防动脉粥样硬化。③LS低剂量组与阳性对照组比较,TC、TG、LDL-C、AI有显著差异。LS低剂量组降低TC效果优于阳性药非诺贝特组(P<0.05),而降低TG、LDL-C、AI效果阳性药非诺贝特组则优于LS低剂量组(P<0.05);升高HDL-C两组无显著差异。④模型组肝脏指数显著高于正常对照组(P<0.01),表明小鼠经连续高脂乳剂灌胃,肝脏作为脂肪分解代谢的主要器官已受到严重损害;阳性药非诺贝特对照组及LS高、低剂量组与模型组比较,均能显著降低肝脏指数(P<0.01),且LS高、低剂量组与阳性药非诺贝特对照组比较有显著差异,表明LS保护肝脏作用效果优于非诺贝特(表1)。
3讨论
HLP是指血浆TC、TG、LDL-C升高或HDL-C降低。高脂血症是促进动脉粥样硬化和冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)的主要危险因素之一,亦与脂肪肝、脑血管病、肥胖等病的发生发展密切相关。中医理论认为,HLP的形成是由于人体阴阳消长失衡,脏腑气血失调,从而产生湿浊、瘀浊。而长期过食膏粱肥甘、辛辣厚味之品易损伤脾胃,致痰瘀互结,积于脉中而成。蓝参降脂方由沙棘、决明子、绞股蓝、葛根、荷叶等药材组成,方中沙棘善于健脾化痰,活血化瘀;绞股蓝味苦燥湿,益气健脾,清热化痰;决明子既善清肝热,又兼平肝阳、益肾阴;葛根、荷叶升发清阳,鼓舞脾胃清阳之气;整方具有健脾祛湿,祛痰化浊,散瘀降脂之功。本实验研究蓝参降脂方对高脂模型小鼠血脂及肝脏指数的影响,结果表明蓝脂降脂方能够显著地降低血清中TC、TG、LDL-C含量,升高HDL-C含量,降低AI,降低肝脏指数,保护受损肝脏。这为蓝参降脂方依据中医药理论治疗高脂血症奠定了实验基础,也为该方剂进一步的推广应用提供了科学依据。
近年来,中草药以其疗效确切,不良反应少和多部位、多靶点综合调脂的优势,已成为降脂药物研究的主要方向[13-16]。随着细胞生物学、分子生物学技术的应用,部分降脂中药的降脂途径、作用环节和药效靶点已逐渐阐明。蓝参降脂方作为治疗高脂血症的经验方剂,其降脂保肝的细胞生物学、分子生物学机制,药效环节及作用靶点等还有待进一步的深入研究。
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