比索洛尔对高血压左室肥大大鼠心肌细胞GRK2表达的影响

　　摘要：目的观察比索洛尔对大鼠肥大心肌细胞G蛋白受体激酶2（GRK2）的影响，探讨比索洛尔改善心肌重塑的可能机制。方法以自发性高血压心力衰竭大鼠（SHR）为研究对象，通过免疫荧光标记、共聚焦显微镜及Werstern Blot等方法，检测比索洛尔干预后SHR左心室心肌细胞中GRK2的表达及其分布。结果心肌总蛋白中GRK2表达6月龄SHR组和WKY组比较无明显变化（60.7±1.9，62.1±2.2，P>0.05），8月龄SHR比6月龄SHR显著增加（78.5±2.1，60.7±1.9，P<0.05），均有心肌细胞膜上的聚积，8月龄SHR药物组比非药物组显著减少（65.9±2.2，78.5±2.1，P<0.05），心肌细胞膜上聚积减少。结论在心肌肥大的过程中，GRK2表达增加且有心肌细胞膜（闰盘）上的聚积，说明GRK2与心肌肥大关系密切，参与心肌肥大细胞信号途径的调控；比索洛尔抑制心肌细胞GRK2的表达以及细胞膜上的聚积，提示改善心肌肥大细胞信号途径的调控可能是比索洛尔逆转心脏重塑的机制之一。

　　关键词：高血压；心肌肥大；信号传导；比索洛尔；G蛋白偶联受体激酶2；大鼠

　　中图分类号：R544.1 R285.5 文献标识码：A

　　doi：10.3969/j.issn.1672-1349.2014.09.037 文章编号：1672-1349（2014）09-1103-03

　　Effects of Bisoprolol on Expression of GRK2 in Cardiac Myocytes of Hypertrophic Ventricle

　　Zhao Ting，Wei Xiaoliang，Lin Xiufang，et al

　　Fifth Affiliated Hospital，Sun Yat-sen University （Zhuhai 519000）

　　Abstract：Objective To investigate the effects of bisoprolol on GRK2 in the pathogenesis of hypertensive ventricle hypertrophy.Methods The expression and subcellular localization of GRK2 in the cardiac myocytes of left ventricle were determined by immunofluorescent labeling，confocal microscopy，and Western Blotting in 8-month-old spontaneously hypertensive heart failure rats （SHR） fed with bisoprolol 2.5 mg/（kg·d）from 6-month-old.Results There was no obvious difference of GRK2 expression between 6-month-old SHR and WKY rats （60.7±1.9，62.1±2.2，P>0.05）.But the expression of GRK2 in 8-month-old SHHF rats was increased in comparison with that both 6-month-old SHR （78.5±2.1，60.7±1.9，P<0.01） and 8-month-old SHHF rats fed with bisoprolol （65.9±2.2 vs 78.5±2.1，P<0.01）.Membrane translocation of GRK2 was increased in 6，8 month-old SHHF rats，but decreased in 8 month-old SHR fed with bisoprolol.Conclusion GRK2 might play a role in the cell signaling transduction leading to cardiac hypertrophy.One of mechanisms in bisoprolol improving cardiac remodeling might inhibit the expression and membrane translocation of GRK2 in the cardiac myocytes.

　　Key words：hypertension；bisoprolol；G-protein-coupled receptor kinase2；cardiac hypertrophy；signaling transduction；rats

　　高血压左心室肥厚是心血管疾病的重要危险因子，高血压导致心肌细胞肥大、心脏重塑，最终导致心力衰竭、心源性死亡的发生，心衰引起机体交感神经的紧张性增强，β受体密度和功能下调，G蛋白受体激酶2（GRK2 ）的表达和酶活性增强[1]，且在肥大心肌亚细胞结构中发现GRK2的重新定位[2]，说明GRK2可能参与了心肌肥大时心肌细胞信号的传导。有研究报道β受体阻滞剂影响改变心肌中GRK2的表达和活性，但缺少对心肌细胞内亚细胞结构GRK2的分析[3，4]。本研究检测比索洛尔干预自发性高血压心力衰竭大鼠（SHR）左心室心肌细胞中GRK2的表达及其亚细胞分布，探讨比索洛尔抑制心脏肥大的机制。

　　1 材料与方法

　　1.1 主要材料 6月龄Wister-Kyoto（WKY）大鼠，6月、8月龄SHR大鼠和6月龄药物组SHR大鼠，予喂养2个月的比索洛尔2.5 mg/（kg·d）至8月龄（8M-SHR-D组），各组大鼠数为12只，均购买于成都达硕科技有限公司，药物放于水槽中让大鼠饮入。兔抗GRK2（C-15）单克隆抗体、辣根过氧化酶标记鸡抗兔抗体、Alexa Flour 488标记牛抗兔抗体、Luminal发光试剂盒均购买于美国Santa Cruz生物技术公司，磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂均购买于美国Sigma公司，膜蛋白抽取试剂盒购买于美国Pierce公司。

　　1.2 实验步骤 ①左心室组织分别提取为总蛋白、胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，然后分别取这4种蛋白上样量25 μg，应用SDS-PAGE电泳，将蛋白电转到NC膜上，X线胶片曝光记录；②将左心室冰冻切片成厚6 μm的组织片，行GRK2免疫荧光标记，并在荧光显微镜下观察，将其结果与Western-Blot结果做比较。上述方法具体步骤参照文献进行[5]。

　　1.3 统计学处理计量资料以均数±标准差（x±s）表示，应用SPSS 10.0软件分析。多组均数间比较采用单因素方差分析（ANOVA），两组均数间比较采用LSD检验。P<0.05表示有统计学意义。各组大鼠左心室重量与左心室组织蛋白中GRK2的相关性用Pearson检验。

　　2 结果

　　2.1 各组大鼠左心室重量比较与6M-WKY组相比，6M-SHR组的心脏重量、心脏重量与体重比以及左心室重量均明显增加（P<0.05）。8M-SHR组三项心脏重量指标进一步增加，与6M-SHR组比较差异有统计学意义（P<0.05）。与8M-SHR组相比，8M-SHR-D组能使3项心脏重量指标明显减少（P<0.05）。详见表1。

　　表1 各组大鼠心脏重量指标比较（x±s）

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