27种染料的化学性质差异较大,有酸性、中性及碱性,有极性也有非极性,但它们都微溶于果汁和葡萄酒中。从结构上看,它们都具有六元环,因而用石墨化炭黑固相萃取小柱均可一次性全部吸附。但经试验,无论在酸性、碱性条件下,还是采用极性或非极性溶剂进行洗脱,回收率均较低。理论上,采用多种性质的固相萃取小柱,通过调节pH值和使用不同极性的溶剂可以对27种染料分别保留,但实际中却需建立多种萃取系统才能适合不同种类的染料的检测,因此检测效率较低,不能满足快速检测的要求。实验中选择对27种染料均有一定溶解能力的乙腈作提取液,采用液-液萃取的方法提取取得了较好的效果。在溶液中加入氯化钠,利用盐析作用促进乙腈与提取液分层,目标物可被提取。

　　2.3方法学验证

　　2.3.1标准曲线和定量限

　　分别取空白果汁、葡萄酒,根据27种染料在质谱中响应的强弱,加入不同浓度的混合标准系列,按1.2节样品预处理方法进行提取,测定提取液中的染料。以选定的定量离子峰面积Y对含量X(μg/kg)作标准曲线,27种染料的线性范围及相关系数见表2。用基质提取液稀释标准曲线的最低浓度,直到获得每种染料的信噪比等于10(S/N=10)的浓度,确定其为该染料的定量限(LOQ)。

　　2.3.2回收率

　　分别取空白果汁、葡萄酒,添加3个不同浓度水平的混合标准溶液,按1.2节样品预处理方法进行处理,采用UPLC-MS/MS测定提取液中的目标化合物。每个浓度水平取5份样品进行试验,计算平均回收率及相对标准偏差(RSD)。可以看出,果汁中27种工业染料的回收率为57.0%～117.7%,RSD为2.4%～17.7%;葡萄酒中各种染料的回收率为40.8%～109.4%,RSD为1.6%～17.9%。

　　2.4方法的应用

　　应用本方法对31份市场采集到的样品(包括橙汁、葡萄汁及其他饮料24件,葡萄酒7件)进行测定,在这些样品中均没有检出上述工业染料。下一步工作将扩大样品采集地点和采集种类,对可疑的样品进行筛查确证。

　　3、结语

　　通过对样品预处理及UPLC-MS/MS测定条件的选择,在果汁和葡萄酒两种基质中实现了不同种类、化学性质差异较大的27种染料的测定,方法的定量限、回收率和精密度均满足痕量分析的要求。方法简便,分析效率高。

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