2.3 黑色素的鉴定 红外光谱分析表明,样品在3 300~3 400 cm-1、 1 640 cm-1附近有强吸收峰, 在1 450~1 600 cm-1、2 349 cm-1、2 900 cm-1附近有弱吸收峰;1 236 cm-1附近有中强吸收峰(图2),根据文献报道3 300 cm-1处的吸收峰是-OH、-NH2的伸展振动引起,1 643 cm-1处吸收峰主要是C═C、-COO-、C═O伸展振动引起,图2与文献[14]的结果相似。不同来源的黑色素光谱图有所差异,但特征峰所在位置相近,说明其主要功能团较为一致。 2.4 菌株S3的鉴定 菌株S3的16S rDNA序列为1 490 bp,Genebank登录号为JN547724。将该序列与EzTaxon Server version2.1中相关序列进行同源性比对,选取同源性较高的21株链霉菌的16S rDNA序列构建系统发育树,如图3所示。菌株S3与S. Puniciscabiei(AF361785)和S.durhamensis(AY999785)处于进化树的中的同一分支,同源性分别为99.595%和99.389%。S. Puniciscabiei能引起马铃薯的疮痂病,在ISP2培养基上培养20 d,孢子颜色由白色变成紫色或红色,菌株S3的孢子无此变化,在纯培养过程中无吸水现象,生理生化特征与S. Puniciscabiei差别不大,所以将菌株S3应归属于S. Puniciscabiei。 3 小结与讨论 在培养、生理生化及孢子特征的基础上,结合16S rDNA序列分析,将菌株S3鉴定为S. puniciscabiei。2003年Park首次报道了S. Puniciscabiei以来,除了对该菌株的形态特征及分子生物学特征进行了研究外[15],尚未见该菌株其他方面的报道。GenBank中,菌株S3的16S rDNA序列与韩国和美国学者分别提交的AF361785和AY999785的同源性为99.595%和99.389%。3种菌株都可产生黑色素,但他们产黑色素的培养基有所差异,如菌株S3可在LB、2216E、Tyr、产孢等培养基上产黑色素。 在培养特征和生理生化特征方面,除了对鼠李糖利用不同外,菌株S3与S. puniciscabiei完全一致。在LB及黄豆粉培养上不产生抗菌活性物质,不具有植物病害生物防治潜力,对其是否引起马铃薯疮痂病有待进一步研究,菌株S3产生的黑色素与已知黑色素共性相符合,具有良好的开发潜力,对其产黑色素的发酵条件将做进一步研究。 致谢:本研究菌株的电镜照片由国家海洋局第三海洋研究所谷力老师拍摄,16S rDNA的拼接由厦门大学生命科学学院罗晶晶完成,在此一并表示感谢! 参考文献: [1] AUBRY A F. Applications of affinity chromatography to the study of drug-melanin binding interactions[J]. Journal of Chromatography B: Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences, 2002, 768(1):67-74. [2] AGODI A. Study of a melanic pigment of proteus mirabilis [J]. Research in Microbiolog,1996,147:167-174. [3] JAMES A M. The antimicrobial properties of melanocytes, melanosomes and melanin and the evolution of black skin[J]. Journal of Theoretical Biology, 2001, 211(2): 101-113. [4] NOSANCHUK J D, CASADEVALL A. The contribution of melanin to microbial pathogenesis[J]. Cellular Microbiology, 2003, 5(4): 203-223. [5] 李建波,宋 欣,曲音波.产胞外黑色素菌株的筛选[J].微生物学通报,2004,31(1):50-54. [6] 王戈林,宁 华, 沈 萍.酪氨酸酶基因工程菌产黑色素的发酵条件研究[J].中国医药工业杂志,1999,30(4):150-154. |