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贵州省辣椒疫霉菌生物学特性和辣椒抗疫病性鉴定方法初探(2)

时间:2014-12-16 09:56 点击:
将自然发病田中采集带回的病果剥开,直接挑取菌丝置于选择性培养基平板上,25~28 ℃恒温培养。待选择性培养基上长出白色菌落后,挑取菌落边缘菌丝尖端于CA斜面上进行纯化。采用灌根法把辣椒疫霉菌回接到辣椒植株,

  将自然发病田中采集带回的病果剥开,直接挑取菌丝置于选择性培养基平板上,25~28 ℃恒温培养。待选择性培养基上长出白色菌落后,挑取菌落边缘菌丝尖端于CA斜面上进行纯化。采用灌根法把辣椒疫霉菌回接到辣椒植株,选取表现出与田间症状相同的菌落,再分离后选取其中的8个菌株(表1)进行鉴定[1,2]。

  1.4  辣椒疫霉菌的鉴定

  在超净工作台上将培养在CA培养基上生长较好的菌丝分别接种在培养基①-⑤上,设置6个温度,分别为8、15、25、30、35、40 ℃,每个处理3次重复。接种6 d后,调查病原菌菌落的生长直径,观察菌落、菌丝、孢囊梗、孢子囊等形态特征。挑取CA培养基上的菌丝块于Petri液中,室温下光照24 h可产生大量孢子囊。挑取产生孢子囊的菌丝块于试管中,加水l mL,用力摇晃5 min,观察孢子囊的脱落情况,测量孢子囊大小和乳突高度[3,4]。

  1.5  辣椒疫病的抗性鉴定

  分别将8个供试菌株用无菌水配制成孢子悬浮液,接种浓度为1 000 CFU/mL,接种4个供试辣椒品种,每品种3个重复。接种采用灌根法,接种量5 mL/株。接种后保持土壤湿润,温度控制在25 ℃左右,6 d后调查各处理的发病情况[5,6]。按病情分级标准调查植株的发病情况[7,8]。

  1.6   病情分级及抗性评价标准

  病情划分为6级。0级:无病斑;1级:病斑面积占叶面积的10%以下;2级:病斑面积占叶面积的10%~20%;3级:病斑面积占叶面积的20%~30%;4级:病斑面积占叶面积的30%~50%;5级:病斑面积占叶面积的50%以上。

  病情指数=Σ(各级病叶数×相对级值)/(调查总叶数×最高级值)×100。

  抗性划分:高抗(HR):病情指数0~5;抗病(R):病情指数5~15;中抗(MR):病情指数15~30;中感(MS):病情指数30~50;感病(S):病情指数50~70;高感(HS):病情指数大于70。

  2  结果与分析

  2.1  贵州省辣椒疫霉菌生物学特性

  2.1.1  不同培养基上的菌落形态特征  25 ℃条件下培养,供试菌株在CA、PDA、RMA、CMA、OMA培养基上表现相近,2~3 d即可形成洁白而丰满的圆形菌落,尤以在CA培养基上菌丝浓密,生长较快。不同培养基上的P1菌株的菌落形态见表2。

  2.1.2  不同温度下菌丝的生长情况  辣椒疫霉菌菌株在不同温度下菌落的生长情况见表3。8个菌株在15~35 ℃的范围内均能生长,最适温度为25~30 ℃,8 ℃和40 ℃都不能正常生长,但是8 ℃的低温只是抑制了菌丝生长,并没有使菌株致死。

  2.1.3  孢子囊的形态特征  8个菌株在各培养基上都能产生成熟的游动孢子囊,发表文章孢子囊形态变化不大,多为圆形、长椭圆形、不规则形等,绝大多数为单乳突,偶有双乳突出现。在CA培养基上诱导的孢子囊的平均长度为33.5~48.4 μm,宽度为25.5~31.5 μm,长宽比(L/B)为1.2~1.8,柄长为29.4~36.2 μm,乳突高为4.7~6.3 μm(表4)。

  2.2  室内叶片抗性鉴定及品种间的抗性差异

  由辣椒疫病室内抗性鉴定结果(表5)可以看出,供试的8个辣椒疫霉菌菌株对4个辣椒品种均有一定的致病性,菌株总体致病力由强到弱P6、 P3、P1、P5、P7、P2、P4、P8,辣椒品种总体抗疫病性由强到弱的顺序为小米椒、遵义辣椒、花溪辣椒、朝天椒。

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