钩齿溲疏的SRAP遗传多样性分析

　　摘要：运用SRAP分子标记研究了山东省3个钩齿溲疏居群的遗传多样性，结果显示，用15对引物共检测到244个位点，其中多态位点167个，物种水平多态位点百分率（PPL） 68.44%，Nei’s基因多样性指数（H） 0.2158，Shannon’s信息指数（I）0.3282，数据表明钩齿溲疏有较高的遗传多样性水平；居群间遗传分化系数（Gst）为0.3685，表明居群间遗传变异只占36.85%，远低于居群内遗传分化；在居群水平上，以崂山钩齿溲疏居群的遗传多样性最高，徂徕山最低；居群间遗传一致度（GI）和遗传距离（GD）变化范围分别为0.8350～0.8884和0.1184～0.1803，居群间的遗传距离与地理位置间没有直接相关性。

　　关键词：钩齿溲疏；SRAP；遗传多样性

　　中图分类号：S685.990.1 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2014）11-0018-05

　　钩齿溲疏（Deutzia baroniana）属于虎耳草科（Saxifragaceae）溲疏属（Deutzia），落叶灌木，分布于辽宁、河北、山西、陕西、山东、江苏和河南[1]。钩齿溲疏花朵洁白，繁密而素净，花期长，且盛开于初夏，正值少花时节，宜丛植于山坡、草坪、路旁或林缘，也是岩石园、花篱的常用材料，花枝可作插花观赏。钩齿溲疏适应性非常强，常生于沟谷、林缘或岩石缝中，耐旱、耐瘠薄、抗寒，对于干旱、少雨的北方城市绿化极为适宜，是北方十分难得的园林绿化、美化材料。此外，钩齿溲疏根、叶、果还可药用。因此，钩齿溲疏具有很高的观赏和经济价值，是一种值得开发的野生植物资源，值得大力引种并繁育推广。

　　一个物种之所以能繁殖存活，并且适应环境改变，根本原因在于其遗传多样性[2]。居群对环境的适应能力在一定程度上由居群的遗传多样性水平制约着，因此通过研究其遗传多样性水平可预测这个居群未来的发展趋势[3]。而目前尚未见从DNA水平上对钩齿溲疏的遗传多样性进行分析的研究和报道。

　　相关序列扩增多态性（Sequence-related amplified polymorphism，SRAP）是通过设计独特的引物对基因ORFs（Open reading frames）的特定区域进行扩增并分析的标记手段[4]。目前已成功应用于作物遗传多样性评价、指纹图谱构建、重要性状的标记以及相关基因的克隆等方面[5～8]。本研究对山东省内21份钩齿溲疏进行SRAP遗传多样性分析，旨在研究其遗传多样性水平，为开发利用钩齿溲疏野生资源、在景观应用中选育优良品种提供分子水平的依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 试验材料

　　试验样品于2012～2013年采自山东崂山、泰山和徂徕山，共21份样品（表1）。同一居群相邻植株采样间距30 m以上，采取新鲜幼嫩叶片放入密封袋中，用变色硅胶干燥。记录所采样品的小地名、海拔、经纬度并编号。

　　1.2 DNA提取

　　选用改良的CTAB法[9]提取样品总DNA，用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量，用紫外分光光度计检测DNA浓度后用ddH2O稀释至50 ng/μL，-20℃保存备用。

　　1.3 SRAP-PCR反应体系和程序

　　SRAP引物设计参照Li等[4]，13个正向引物和19个反向引物共组成247对引物组合，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。从中筛选出15对扩增条带数量多、清晰、稳定的引物组合（表2）用于正式扩增。

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